湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物保健工程技術(shù)研究中心是由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院、長沙綠葉生物科技有限公司、長沙樹人牧業(yè)科技有限公司聯(lián)合組建的產(chǎn)學(xué)研合作科研平臺。中心聘請湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)袁慧教授等10多名資深專家擔(dān)任高級顧問,青年學(xué)者文利新博士擔(dān)任中心主任,中心擁有一批年輕的博士和碩士等組成的研發(fā)隊伍,主要從事動物保健理論、動物亞健康調(diào)控、功能性飼料和功能性畜產(chǎn)品的研究和開發(fā)。其主要為豬場提供免疫監(jiān)測、免疫程序制定的咨詢等服務(wù),免疫增強和調(diào)節(jié)劑以及抗免疫應(yīng)激劑的產(chǎn)業(yè)化和免疫保健技術(shù)的推廣,為養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展保架護航。
湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物保健工程技術(shù)研究中心提供檢測項目:豬瘟、偽狂、藍耳、圓環(huán)和口蹄疫等抗體檢測。
為了使廣大養(yǎng)殖朋友更好的對豬場進行疾病控制,我們制定一份病料采集方法注意事項,供廣大養(yǎng)殖朋友參考。
采集病料前需要進行器械的滅菌消毒,使用一次性針頭和注射器及真空采血管;采取一種病料,使用一套器械與容器;做好計劃,如要采集足夠的數(shù)量及采集的部位、種類等;還要準備采集后的用具等消毒、清洗液及容器等用品。
具體步驟如下:
1 準備好滅菌(至少是干凈的,但必須保證干燥)干燥的帶蓋子的塑料試管或者青霉素瓶若干;準備好專業(yè)的采血針,或者一次性注射器(5-10毫升)。保證每個血樣一個瓶子或一個針筒。
2 采血。采血前,在相應(yīng)的注射器或容器上做好標記。
(1)耳靜脈采血。本法為最常用的取血法之一(適用于中、大豬)。將豬保定后,或由助手以手扶住頭部及耳部。選耳靜脈清晰的耳朵,用75%酒精局部消毒,待干。用手指輕輕摩擦豬耳,使靜脈擴張,用連有針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管,等血液漏出取血或?qū)⑨橆^逆血流方向刺入耳緣靜脈取血,取血完畢用棉球壓迫止血。黑色皮膚豬耳靜脈看不清,用手電筒在耳、腹面照射利于采血。
(2)前腔靜脈采血(適用于仔豬,小豬):豬前腔靜脈,在第一對肋骨間的胸腔入口處的氣管腹側(cè)面,由左右兩側(cè)頸靜脈和腋靜脈匯合形成。該血管在一周齡豬直徑約5毫米,成年豬約1厘米以上。采血部位在第一對肋骨與胸骨柄結(jié)合處直前,但由于左側(cè)靠近隔神經(jīng),以右側(cè)采血為宜。
(3) 注意事項:
選用合適的注射器及針頭
公母豬宜選用16號 50mm針頭;30kg以上的中大豬,宜選用12號 38mm針頭;10-30kg小豬,可選用9號 25mm(一次性注射器常配的針頭);10kg以下仔豬,應(yīng)選擇9號 20mm針頭(一次性注射器所配的另一種規(guī)格的針頭)。
選準進針的部位
一般來說,30千克以下的小豬應(yīng)采兩前肢與氣管交匯處,種公母豬和30千克以上的中大豬可選頸部最低凹處。進針時又要掌握好一定的方向、角度和深度,要及時調(diào)整。血管被刺穿,會引起血腫,要立即停止采血,須換另一頭豬采血。特別要注意的是對仔豬采血時,不能太猛、太深,以免傷及心包或心臟。
特別指出,血液和血清是不同的概念!血清是血液的組成部分,它必須從血液中分離出來后,才能用于血清學(xué)試驗,但是這種分離過程需要專業(yè)人員來操作。因此,采集的血樣,最好在凝固后,直接送到檢測單位,以保證血清學(xué)試驗的正確進行。一般采血2~5毫升就足以滿足實驗室診斷的用量了。重點提示,用于血清學(xué)試驗的血樣,不能加任何抗凝血劑!
3 血液保存:將采完血樣的注射器活塞,微微拔出一些,使針筒內(nèi)留有部分空氣,然后蓋好針頭蓋子,將注射器針頭向上成30度角,斜放,等待血液完全凝固(大約10~30分鐘),此過程中不能移動注射器,防止溶血。用真空采血器采集的血樣,直接傾斜放置好。夏天在常溫下放置一段時間,冬天要放置在25~37℃溫水中一段時間,以利于血液中血清的析出。血樣送檢時,在保溫箱加適量的冰塊防止血液變質(zhì),送檢過程中盡量防止劇烈振蕩。
注意事項:(1)擦拭采血部位的酒精未干,不要立即采血。血液混進酒精后易 造成溶血(使檢測結(jié)果不準);
(2)血液在運輸過程中,防止坐摩托車、拖拉機等劇烈展蕩,使血細胞破裂引起溶血(要注意血液防震)
(3)血液存放的容器要洗凈,確保干燥。
疑似豬瘟的病料采集:
1 放血。先把豬放血處死,在從大腿內(nèi)側(cè)將皮膚、肌肉切開。
2 解剖摘取扁桃體。從胸部中線偏右處,切斷肋骨,打開胸腔,在氣管與肺臟連接處向前5~10厘米位置,割斷氣管,并順著氣管向前割開,直至咽喉部,從后向前將氣管割斷一半,這時就可以在舌跟靠近上腭的左右兩邊看到兩個淋巴結(jié),即扁桃體。小心取下扁桃體放置于干凈的保鮮袋中,并做標記。
3 解剖摘取肺門淋巴結(jié)。一只手握住氣管切斷處,使勁向外拉出肺臟,另一只手幫忙扯斷肺臟與身體的連接,并將整個肺臟翻轉(zhuǎn)過來,使背面向上,此時可在氣管分為支氣管,與肺臟連接處,找到分別位于左右兩側(cè)的兩個肺門淋巴結(jié),小心摘取,放置于另一個干凈的保鮮袋中,并做標記。
4 肺臟樣品的采集。如有必要,此時可將割取部分肺臟樣品,一般只要割取介于病變和正常組織之間的部分,放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記,當然也可以將整個肺臟保存。
5 解剖摘取腹股溝淋巴結(jié)。將兩個后腿,向下向外壓,就可以在兩側(cè)凹陷的腹股溝處中間部位,看到微微或明顯隆起,即腹股溝淋巴結(jié),小心割開皮膚和淋巴結(jié)表面的被膜,小心摘取,放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記。
6 解剖摘取脾臟。沿腹中線將腹部皮膚、肌肉和腹膜,小心切開并打開腹腔,在腹腔的左側(cè)位于胃和回腸下面,找到脾臟,小心摘取,放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記。
7 解剖摘取腸系膜淋巴結(jié)。從腹腔的右側(cè)位于肝臟和胃下面,找到腸系膜,在腸系膜靠近腸道的末端,可以看到很多結(jié)節(jié),即腸系膜淋巴結(jié),小心摘取,放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記。
8 流產(chǎn)胎兒。通常木乃伊胎不能作為檢測樣品。對于新鮮流產(chǎn)的胎兒,可作為檢測樣品。對于流產(chǎn)日齡較早的胎兒,可取整個胎兒保存;如果是晚期流產(chǎn)的胎兒,最好根據(jù)上述步驟,摘取相應(yīng)組織,保存送檢。胎兒的保存方法同上。
疑似藍耳病病例的病料采集:
具體病料采集程序與豬瘟病料的采集基本一致(包括步驟1、3至6、8),需要強調(diào)的是,在藍耳病的檢測中,必須包括淋巴結(jié)和肺臟樣本!如果是檢測流產(chǎn)胎兒,那么,最好能剪取部分胎衣液或剪取胎衣樣本,保存方法同上。
疑似圓環(huán)病毒感染病例的病料采集:
對于疑似圓環(huán)病毒感染的病例,病料采集包括步驟1、3至7。記住,在圓環(huán)病毒的檢測中,必須包括淋巴結(jié)樣品。
疑似偽狂犬病病例的病料采集:
偽狂犬病病毒可危害呼吸系統(tǒng)、繁殖系統(tǒng)或中樞神經(jīng)系統(tǒng),因此,病料采集包括步驟1至8。同時,最好能夠采集神經(jīng)系統(tǒng)的樣品。具體步驟為用手手術(shù)刀片將豬的頭皮剝?nèi)ィ冻鲱^蓋骨,然后用鑿子(也可可用一字螺絲刀),輕輕鑿開頭蓋骨,并清理骨頭碎片,等整個大腦露出后,小心用手摘取,放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記。特別提示,因為現(xiàn)在用的偽狂犬病疫苗絕大多數(shù)都是基因缺失疫苗,因此還需進行血清學(xué)抗體的檢測。
疑似乙型腦炎病例的病料采集:
病料采集包括步驟1、5、8。注意,乙型腦炎病毒可感染人類,特別是兒童,導(dǎo)致嚴重的腦炎,因此取病料時,請務(wù)必帶上乳膠手套,并小心操作。
疑似傳染性胃腸炎和流行性腹瀉病例的病料采集:
本病的病料采集,包括步驟1、5、7。同時需要采集腸道樣品。從腹腔中剪取病變的小腸10~15厘米,從一側(cè)將腸道剪開,輕輕刮去腸道內(nèi)容物,然后放置于一個干凈的保鮮袋中,并做標記。
疑似流感病例的病料采集:
按照上述方法采集肺臟和淋巴結(jié)即可。
檢測病料的運輸注意事項:
死亡的豬應(yīng)盡快采集,夏天不應(yīng)超過2小時,冬天不超過6小時(還要視具體溫度)。采集豬的病料必須新鮮,盡可能減少污染。用于檢驗的內(nèi)臟組織塊不必太大。無論是運送新鮮的病料還是冰凍的病料,保證整個過程中,病料始終處于低溫狀態(tài),十分重要。一個簡單的方法是,用廢棄的礦泉水瓶,灌水后,放置在冰箱中,制備冰塊,在病料運輸時,將足量的冰塊和病料一起放置在泡沫箱中,用冰塊包裹所有病料,如果冰塊不夠多,最好將冰塊放置在病料的上面和下面。密封后,快速運送到檢測單位。送檢過程中要防止傾倒、破碎、避免樣品泄漏,要注意有的樣品不能劇烈展蕩,要注意緩沖放置,所有樣品都要貼上能標示采樣豬的詳細標簽。
注意事項:1 病料要新鮮 必須是選取新鮮及有病變部位的材料
2 取材要有代表性 對每一器官,應(yīng)在各個不同部位多取幾塊組織,并且病變部分應(yīng)盡量附帶一些周圍的健康組織。
豬前腔靜脈采血圖:
豬耳靜脈采血圖片: