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隨著養(yǎng)豬業(yè)的迅速發(fā)展，豬鏈球菌病也在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，尤其在養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達的地區(qū)，豬鏈球菌病發(fā)病率也越高。該病是由多種溶血性鏈球菌引起的一種多型性疫病，對易感豬群可導致敗血癥，引起突然死亡，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失[1]。該病的防治手段主要是使用藥物和疫苗，在獸醫(yī)臨床主要應用的大環(huán)內(nèi)酯類藥物有紅霉素和泰樂菌素[2]。近年來，隨著大環(huán)內(nèi)酯類藥物在養(yǎng)豬業(yè)的廣泛應用，豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥株也迅速發(fā)展，耐藥率持續(xù)增加。
1 豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥狀況
由于大環(huán)內(nèi)酯類藥物對革蘭陽性球菌和支原體有廣譜的抗菌活性，毒副作用小，價格低廉，不僅在人醫(yī)臨床上作為一線用藥或聯(lián)合用藥制劑，而且在獸醫(yī)臨床上也廣泛應用。近年來一些國家均報道豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥性呈上升趨勢，存在不同的耐藥機制和耐藥表型，且表現(xiàn)為多重耐藥，從而對該病的治療構成了嚴重的威脅。
1998年至2003年分離自江蘇、上海、杭州等地的38株豬源鏈球菌及2株德國、丹麥株的藥敏試驗結果顯示，豬鏈球菌對紅霉素、羅紅霉素、泰樂菌素及替米考星的耐藥率分別達72.5%、67.5%、72.5%和62.5%[3]。2000年至2001年分離自長春地區(qū)不同豬場的22株豬鏈球菌的耐藥性試驗表明，對紅霉素和阿奇霉素耐藥率均為86%[4]。分離自河南省15個縣、市33株豬鏈球菌對紅霉素耐藥率為78.8%[5]。上海、沈陽、吉林、長春分離的36株豬鏈球菌對阿奇霉素耐藥率為86.1%[6]。檢測常用抗菌藥物對東北地區(qū)豬源鏈球菌的體外抗菌活性，發(fā)現(xiàn)對大環(huán)內(nèi)酯類/林可酰胺類藥物耐藥率高達82%～100%[7]。對浙江部分地區(qū)屠宰場38株豬鏈球菌耐藥情況進行調(diào)查，表明對紅霉素、麥迪霉素耐藥菌株分別為57.9%和81.6%[8]。Martel A等[9]檢測了87株1999年至2000年分離的豬鏈球菌，其中71%的菌株對多種大環(huán)內(nèi)酯類/林可酰胺類藥物表現(xiàn)高耐藥性。Vela A I等[10]對151株分離自西班牙的豬鏈球菌進行藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)超過87%的分離株對大環(huán)內(nèi)酯類和林可酰胺類藥物耐藥。
通過以上數(shù)據(jù)可以看出，國內(nèi)外豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥嚴重，耐藥率均達50%以上。近年來由于大環(huán)內(nèi)酯類藥物的大量應用，以及長期在飼料中添加亞治療劑量該類藥物，增加了藥物對細菌的選擇性壓力，亦加速了細菌耐藥性產(chǎn)生[11]。
2 豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類藥物耐藥機制
大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物通過結合細菌核糖體靶位點50 S亞基，促使肽酰tRNA在移位的過程中從核糖體上脫落下來，而阻礙細菌蛋白質合成[12]。鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥通常是由于核糖體靶位改變以及外排泵介導的藥物外流。
2.1 核糖體靶位改變
核糖體靶位改變包括甲基化酶修飾、核糖體大亞基23 S rRNA/蛋白質突變及抗性短肽所引起的抗性[13]。其中甲基化酶引起的靶位改變最常見，由Erm家族催化23 S rRNA上單個腺嘌呤殘基甲基化，導致核糖體構象發(fā)生改變，可顯著降低大環(huán)內(nèi)酯類藥物與靶位點的親和力。鏈球菌中主要的編碼甲基化酶耐藥的是ermB基因和ermA基因。因大環(huán)內(nèi)酯(M)、林可酰胺(L)及鏈陽菌素B(SB)的作用部位相仿，所以耐藥菌對這三類藥物常交叉耐藥，稱為MLSB(macrolide-lincosamide-streptogramin B)耐藥。由erm基因介導的MLSB耐藥可分為內(nèi)在型耐藥(cMLSB)和誘導型耐藥(iMLSB)。內(nèi)在型由于翻譯弱化系統(tǒng)的堿基發(fā)生改變，使erm基因mRNA有活性，能被核糖體翻譯，導致核糖體在合成時甲基化。在誘導劑存在或不存在情況下對MLSB類抗生素具有同等程度的耐藥。誘導型erm基因的mRNA不具活性，僅在可產(chǎn)生誘導的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素存在條件下被激活，翻譯erm甲基化酶表達耐藥[14]。在鏈球菌，誘導劑除14、15元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯外，還包括16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯和林可酰胺類，iMLSB耐藥菌對14、15元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥而對16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯、林可酰胺及奎奴普丁仍敏感(部分菌株對16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯和林可酰胺也耐藥)[15]。
2.2 主動外排系統(tǒng)
在鏈球菌中，由mef基因編碼產(chǎn)生一個能量依賴的外排蛋白，可將藥物泵出細胞外[16]。該機制提供一種新的耐藥表型即M表型，對14、15元大環(huán)內(nèi)酯低水平耐藥(最小抑菌濃度MIC 1 μg/mL～32 μg/mL)，對16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯、林可酰胺及鏈陽菌素B敏感。mef基因有mefA和mefE兩種，兩者在核苷酸水平上具有90%的同源性[16]。
豬鏈球菌對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因主要由甲基化酶基因ermB、ermA和外排泵基因mefA編碼，均為獲得性耐藥，位于轉座子或質粒上，可在不同種屬細菌間傳播。尚未在豬鏈球菌發(fā)現(xiàn)23 S rRNA/核糖體蛋白突變引起的耐藥，該耐藥機制在肺炎鏈球菌、葡萄球菌及A群鏈球菌中均有報道。目前國內(nèi)外已報道的豬鏈球菌大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因包括ermA、ermB、ermC和mefA，其中最常見的是ermB基因編碼的內(nèi)在型(cMLSB)耐藥，iMLSB和M型耐藥菌株的比例尚不高。如王麗平等[17]研究國內(nèi)獸醫(yī)臨床分離的111株鏈球菌耐藥性表明，ermB基因檢出率為85.5%，cMLSB耐藥表型占81.6%，M型和iMLSB型耐藥分別為6.6%和11.8%。楊建江等[18]對長春地區(qū)22株豬鏈球菌臨床分離株均擴增出ermB基因，而未擴增出mefA/E基因，cMLSB耐藥表型達86%，未檢測到M型耐藥，提示豬鏈球菌M型耐藥所占比例非常低。這與Martel A等[9]的研究結果一致。
